Жёлтый флуоресцентный белок (англ. Yellow Fluorescent Protein) — генетическая мутантная форма зелёного флуоресцентного белка (GFP), выделенного из медузы эквореи Aequorea victoria. Характеризуется максимумом поглощения при 514 нм и максимумом флуоресценции при 527 нм. Широко используется в качестве флуоресцентной метки в клеточной и молекулярной биологии для изучения экспрессии клеточных белков. Кроме него разработана серия других мутантных форм GFP, таких как синий, циановый и др[1].
Применение для FRET
правитьСпектр поглощения YFP довольно сильно пересекается со спектром флуоресценции CFP (англ. Cyan Fluorescent Protein), поэтому эти два флюорофора используются для создания биосенсоров, в основе работы которых лежит явление Фёрстеровского переноса энергии (FRET). Такие сенсоры используются для выявления определённых событий, происходящих в живых клетках. В частности, таким образом можно определять активность ферментов.
Как правило, молекула такого сенсора включает в себя 4 домена[2]:
- белок, являющийся носителем сенсора (это может быть практически любой белок);
- флюорофор CFP;
- домен, меняющий свою структуру в ответ на определённое воздействие (например, фосфорилирование);
- флюорофор YFP.
При облучении такого сенсора лазером с длиной волны, возбуждающей только CFP (например, 440 нм — почти не возбуждает YFP, но сильно возбуждает CFP), можно наблюдать флуоресценцию обоих флюорофоров. После соответствующего воздействия на домен 3 происходит изменение структуры сенсора, в результате чего флюорофор YFP отдаляется от CFP и эффективность Фёрстеровского переноса падает (в зависимости от того, на какое расстояние флюорофоры были отдалены друг от друга). В результате интенсивность флуоресценции CFP возрастает, а YFP — падает. Таким образом, по отношению флуоресценции YFP к флуоресценции CFP можно количественно оценить изменение конформации биосенсора.
См. также
правитьПримечания
править- ↑ Uemura, T.; Kim, H.; Saito, C.; Ebine, K.; Ueda, T.; Schulze-Lefert, P.; Nakano, A. Qa-SNAREs localized to the trans-Golgi network regulate multiple transport pathways and extracellular disease resistance in plants (англ.) // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America : journal. — 2012. — Vol. 109, no. 5. — P. 1784—1789. — doi:10.1073/pnas.1115146109. — PMID 22307646. — PMC 3277133.
- ↑ Access : Midzone activation of aurora B in anaphase produces an intracellular phosphorylation gradient : Nature. Дата обращения: 7 декабря 2010. Архивировано 31 октября 2010 года.
Литература
править- Miyawaki A., Llopis J., Heim R., et al. Fluorescent indicators for Ca2+ based on green fluorescent proteins and calmodulin (англ.) // Nature : journal. — 1997. — August (vol. 388, no. 6645). — P. 882—887. — doi:10.1038/42264. — PMID 9278050.